His琼脂糖凝胶

名称：His琼脂糖凝胶

英文名称：His-probe antibody agarose, His-agarose

目录号：QYA04393AAC

规格：1ml（His-tag antibody 500ug, agarose 250ul, 保护液750ul）

产品介绍

His琼脂糖凝胶是His-tag antibody (QYA04393A) 与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的蛋白纯化介质。专门用于纯化和检测细胞裂解液或菌体裂解液中的His-标签蛋白。适用于IP实验。当细胞或菌体裂解液与本品混合，His标签蛋白与凝胶特异性结合，其他蛋白不结合。本品结构稳定，结合His标签蛋白效率高，对纯化体系pH值要求不严格，允许在pH5.0-8.0之间进行结合。

产品性能

IP实验流程

试剂及耗材准备

IP缓冲液：PBS, pH7.4

洗脱缓冲液：100mM Glycine, pH2.7

中和缓冲液：1M Tris-HCl, pH9.0

实验方案

本实验方案使用50ul His-琼脂糖凝胶（200ul His-琼脂糖凝胶混悬液），可结合至少100ug His标签蛋白。

具体操作中，可根据蛋白的表达量，调整所使用的His-琼脂糖凝胶、IP缓冲液、洗脱缓冲液、中和缓冲液体积。

A.His-标签蛋白免疫沉淀

1. 在离心管中加入200ul His-琼脂糖凝胶混悬液，3000g，4℃离心5min，弃上清。
2. 向His-琼脂糖凝胶中加入0.5ml IP缓冲液，用上述条件离心，弃上清。重复2次。
3. 将200-1000ul细胞裂解液加入His-琼脂糖凝胶中。室温旋转孵育2h，或4℃旋转孵育过夜。
4. 将孵育好的免疫复合物-凝胶用上述条件离心，弃上清。
5. 加入1ml IP缓冲液，用上述条件离心，弃上清。重复3次。

B.His-标签蛋白洗脱

若洗脱的His-标签蛋白需要进行蛋白功能试验，使用方案1。若需要进行电泳、WB，使用方案2。

方案1：

1. 加入50ul洗脱缓冲液，室温孵育5min。
2. 用上述条件离心，收集上清。重复1次。
3. 合并两次离心收集的上清，加入10ul中和缓冲液，将pH调整至7.0左右。
4. 将目的蛋白进行透析、脱盐，以供其他试验使用。

方案2：

1. 向琼脂糖凝胶-免疫复合物中加入蛋白上样缓冲液，95℃加热5min。
2. 用上述条件离心，小心将上清转移到新EP管中。
3. SDS-PAGE电泳检测目的蛋白。