中文名称：Western 及IP细胞裂解液

英文名称：Western & IP cell lysis buffer

目录号：QYR027

规格：100ml

保存条件：4℃

保质期：1年

产品描述：

Western及IP细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，可从各类实验室培养的哺乳动物细胞中高效裂解并提取蛋白质，包括贴壁细胞和悬浮细胞。本试剂可提取各种细胞质、细胞膜、细胞核蛋白。本试剂裂解的样本，可以用于 Western，免疫沉淀(IP)，免疫共沉淀(co-IP)等实验。与传统的RIPA细胞裂解液相比，本试剂在蛋白提取过程中不会产生粘稠的DNA团块，能在一定程度上提高蛋白产量，并使后继实验操作更加简单。本试剂不含蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，如实验需要可额外添加。

本试剂主要成分为：20mM Tris-HCl (pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100。

推荐使用浓度：

6孔板每孔细胞加入100ul本试剂。如果细胞密度非常高，可以加大裂解液的用量到150-200ul。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

实验例

对于培养细胞样品：

1. 取适当量的Western 及IP细胞裂解液，加入PMSF及其他的蛋白酶抑制剂。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用胰酶消化细胞或用细胞刮刀刮除细胞。用 PBS清洗细胞1次。按照 6 孔板每孔加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。

吹打混匀。冰上静置20min，每5min使用漩涡混匀器混匀1次。

P.S.充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，比较容易裂解充分。

3. 12000rpm, 4℃，离心10min。将上清转移到新的EP管中。即可进行后续的 Western，IP，co-IP等实验。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 取适当量的Western 及IP细胞裂解液，加入 PMSF及其他的蛋白酶抑制剂。

3. 按照每 20 mg组织加入 100-200ul裂解液的比例加入裂解液。

P.S.如果裂解不充分，可以适当添加裂解液；如果需要更高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆，冰上静置，直至充分裂解。

5. 12000rpm, 4℃离心10min。将上清转移到新的EP管中。即可进行后续的Western，IP，co-IP等实验。

P.S.每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200 ul本试剂裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。

6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，漩涡混匀器混匀，使样品裂解充分。离心取上清，用于后续实验。