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纳米转染

纳米转染

纳米技术的新型转染试剂-NanoFectin Transfection Reagent,它能够在DNARNA存在时自我组装成纳米粒子,这些混合物很容易被目标细胞用于基因的高效传递,从而将外源分子如DNAsiRNA等导入细胞,是领先于脂质体转染的新型细胞转染工具。

纳米转染原理

作用机理为纳米粒子携带目的基因通过细胞内吞作用进入细胞,并有效促进目的基因-转染试剂复合体从细胞内溶酶体的释放,以及目的基因在细胞内的有效释放。

纳米转染操作步骤

质粒DNA转染 (24孔板)

1)细胞转染前应铺板18-24小时,使细胞密度在转染时达到5080%的汇合率。

2)在转染前2小时向每孔添加0.5 ml新鲜的含血清和抗生素的完全培养基。

3)对于每孔,在EP管中稀释0.5 μg DNA50μl无血清DMEM中,轻轻混匀。

4)在同一管中加入1μl 转染试剂,涡旋5-10秒,短暂离心使之聚集到底部。

5)室温孵育15分钟,促进转染试剂/ DNA复合物的形成。

6)将50μl 转染试剂/ DNA混合物滴至细胞,轻轻混匀。

7)将细胞放回培养箱中继续培养。

8)转染24-48小时后检查转染效率。

包装慢病毒程序

转染前18-24小时,接种293TN293FT细胞,使细胞密度在转染时达到6080%的汇合率。

2ml EP管中添加1-1.6ml DMEM(无血清)。

EP管中添加45μl pPACKH14.5μg目标质粒,吹打混匀。

再加入55μl 转染试剂,vortex 10秒混匀。

在室温下孵育DMEM-质粒-转染试剂混合物15分钟。

DMEM-质粒-转染试剂混合物滴入平板中,轻轻涡漩。

将培养板放回培养箱(37℃,5%的CO2)中继续培养。

siRNA转染(24孔板)

转染前16-24小时,接种细胞,使细胞密度在转染时达到4060%的汇合率。

准备siRNA:用RNase-Free Buffer (pH 7.5) 稀释siRNA10μM94℃,加热2分钟。冷却至室温, 分装,-20℃存储。

准备转染试剂-siRNA复合物:向EP管中添加100μl无血清DMEM,向每管中添加SiRNA20 pmol, 40 pmol, 80 pmol),测试最佳加入量。向每管中加入1μl 转染试剂,涡漩5秒,然后短暂离心。室温孵育15分钟。

将转染试剂-siRNA混合物滴加到每个孔中。

将培养板放回培养箱(37℃,5%的CO2)中继续培养1-3天。

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