实验原理
将目的基因构建至带有GST(Glutathione S transferase)标签或者His标签的载体上,通过诱导表达出GST标签或者His标签融合探针蛋白。通过GST标签将融合探针蛋白与层析柱上或固相化载体上的GTH(Glutathione)亲和或者Ni填料亲和。当与融合探针蛋白有相互作用的靶蛋白通过层析柱或固相载体时就可被吸附而分离。从而在体外验证两个蛋白是否有相互作用,或者寻找可能与目的蛋白有相互作用的靶蛋白。
一、服务内容
1、GST标签或者His标签融合蛋白表达载体的构建和表达验证
2、验证融合探针蛋白与未知(或靶)蛋白间的相互作用
3、验证探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用
4、免费进行胞浆蛋白内参检测(胞核蛋白内参需收取费用)
二、样品要求(样品处理及保存见附件)
1、融合探针基因和靶基因载体>10μg,或甘油菌(-20摄氏度保存时间不超过一年)
2、靶细胞>1×107
三、服务特点
1、摸索每个基因合适的诱导表达条件
2、优化靶蛋白与融合探针蛋白共孵育条件
3、优化靶细胞裂解条件及与融合蛋白蛋白共孵育条件
四、收费标准
服务项目 |
收费标准¥ |
实验周期 |
融合探针基因和靶基因载体构建 |
请参考载体构建服务目录 |
3-4周 |
融合探针蛋白和靶蛋白诱导表达 |
4000/mg |
3-4周 |
靶细胞裂解条件摸索 |
3000/细胞 |
2-3周 |
Pull down验证蛋白互作 |
7500/目的蛋白 |
3-4周 |
五、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的蛋白样品(直接进行pull down)
2、探针基因和靶基因相关序列信息
3、靶细胞系培养条件
4、阳性对照样品(尽量提供)
5、相关文献(可选)
六、提交给客户结果
1. 完整实验报告 (包括具体实验步骤和实验图片等)
2. 完整基因序列的质粒>10μg和载体甘油菌株
3. 完整测序报告和序列碱基图
4、WB实验曝光结果(胶片及扫描图)
5、IOD值分析报告(可选)
七、服务项目说明
客户要求加可曝光marker的,需事先说明,并按照可曝光项目收费