将带有TAP标签的融合蛋白在细胞中表达,并与内源相互作用蛋白形成复合物,细胞裂解后经FLAG标签亲和层析柱纯化,靶蛋白与FLAG抗体特异结合,从而使含有标签的复合物得到第一次纯化。将纯化后的含有靶蛋白的复合物与层析柱分离,并经过含有HA标签抗体的亲和层析柱进行第二次纯化,靶蛋白上HA标签可与HA单抗结合,从而使含有HA标签的复合物得到第二次纯化。再加入过量螯合剂后与亲和层析柱分离使含有靶蛋白的复合体得到分离纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),复合物中的各个蛋白被分开,切胶、胰酶消化后,即可通过质谱鉴定复合物中与靶蛋白相互作用各个蛋白的氨基酸序列。
一、服务内容
1、TAP标签的融合蛋白表达载体的构建
2、细胞内源相互作用蛋白的分离
3、质谱鉴定复合物中各个蛋白的氨基酸序列
4、相互作用蛋白细胞内验证(CoIP)
5、相互作用蛋白细胞外验证(GST pulldown)
二、样品要求(样品处理及保存见附件)
1、相关基因载体或序列
2、待检测细胞系
三、服务特点
1、可得到大量含靶蛋白的复合体;
2、蛋白表达及与复合物的结合都接近生理水平,筛选的相互作用蛋白阳性率高;
3、TAP两步亲和纯化方法,提高了纯化产物的特异性。
四、收费标准
服务项目 |
收费标准¥ |
实验周期 |
TAP亲和纯化互作筛选互作蛋白 |
||
TAP标签质粒的构建(FLAG,HA双标签) |
6000/基因 |
3-4周 |
TAP标签质粒的构建(其它标签) |
请询价 |
2周 |
TAP融合蛋白纯化 |
6000/mg |
2周 |
细胞内源互作蛋白的筛选 |
20000/样品 |
2周 |
组织内源互作蛋白的筛选 |
25000/样品 |
2周 |
互作蛋白的质谱鉴定 |
2500/样品 |
2周 |
CoIP验证蛋白互作 |
8300/目的蛋白 |
3-4周 |
Pull down验证蛋白互作 |
请参考Pull down目录 |
4-6周 |
五、客户提供材料
1、相关基因信息和细胞系培养条件
2、相关质粒信息和质粒> 100 μg
3、相关文献(可选)
六、提交给客户结果
1、TAP标签质粒和甘油菌
2、质粒测序结果和碱基丰度图
3、TAP融合蛋白
4、互作蛋白鉴定结果(质谱结果)
5、CoIP结果(蛋白纯化SDS-PAGE电泳图)
6、Pull down结果(蛋白纯化SDS-PAGE电泳图)
七、服务项目说明
客户要求加可曝光marker的,需事先说明,并按照可曝光项目收费